產(chan) 品名稱：豚鼠髒器組織白細胞分離液試劑盒

（細胞培養(yang) 及分子生物學）說明書(shu)

【產(chan) 品組成】

為(wei) 方便廣大用戶使用，試劑內(nei) 容如下：

 名稱 產(chan) 品編號 規格

A 各種動物外周血白細胞分離液 詳見附錄 1 2×100ml

B 紅細胞裂解液（贈品） NH4CL2009 100ml

C 全血及組織稀釋液（贈品） 2010C1119 100ml

D 細胞洗滌液（贈品） 2010X1118 100ml

注：本試劑內(nei) 容中各單品可根據貨號單獨購買(mai) ，客戶可根據實際使用情況自行選擇購買(mai) 。

【預期用途】

適用於(yu) 從(cong) 動物抗凝血液中分離白細胞，無菌條件下所分離的白細胞可用於(yu) 分子生物學及

細胞培養(yang) 等。本品僅(jin) 供科研使用。

【檢驗原理】

本分離液為(wei) FICOLL、羥乙一基澱粉 550 與(yu) 泛影酸葡甲胺的混合液。抗凝血液可在分離液

中分層。離心時，在 FICOLL、羥乙一基澱粉的作用下紅細胞與(yu) 粒細胞聚集並迅速沉降；此時，

白細胞仍處於(yu) 分離液上層及分離液層，紅細胞汙染可通過紅細胞裂解液裂解紅細胞去除。大

部分血小板可在細胞清洗低速離心過程中去除。

其他人及動物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散係數及細胞

帶電不同，用戶在製定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

【*但不提供的儀(yi) 器及耗材】

可提供 400g 離心力的水平轉子離心機、15ml 玻璃離心管、吸管等。

【注意事項】

1. 使用前，本分離液需複溫至 18-22℃。為(wei) 獲得*的實驗結果，在取血後 2 小時內(nei)

進行實驗，血液提取後存放時間越長細胞活性越低。

2. 實驗過程中，如需稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩衝(chong) 液及培養(yang) 液，其

成分會(hui) 導致血細胞凝集大大降低細胞得率及純度。本公司生產(chan) 的全血及組織稀釋液和細胞洗

滌液不含 Ca、Mg 離子、低內(nei) 毒素水平且含細胞和保護成分，推薦使用。

3. *抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會(hui) 影響細胞活性。應

注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體(ti) 積。

4. 當血液樣本粘度過高或血液樣本大於(yu) 等於(yu) 3ml 時，*稀釋方法：將血液於(yu) 18-22℃以

250g 離心 10 分鍾，棄去血漿，補充添加全血及組織稀釋液（產(chan) 品編號：2010C1119），添

加量為(wei) 所棄去血漿體(ti) 積的 1.5-2 倍，混勻備用。注：不當的稀釋方法會(hui) 降低細胞得率及活性。

5. 實驗操作時，不可使用含粉手套、不可使用內(nei) 毒素含量過高的液體(ti) ，手套中的粉末顆粒

及高內(nei) 毒素會(hui) 激活細胞從(cong) 而降低細胞得率及活性。

6. 本實驗不可使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料製品，其帶有的靜電作用將導致細胞

貼壁影響分離效果。

7. 吸取過多的白細胞層及分離液層會(hui) 導致分離液交界處的粒細胞被吸出從(cong) 而使混雜的粒細

胞數量增加。

8. 吸取過多的白細胞層上層溶液會(hui) 導致血漿蛋白及血小板混雜。

9. 如需進行細胞計數，則需血液貯藏時間不得多於(yu) 10 小時，否則將導致細胞被激活，得率降低。

10. 為(wei) 去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上 4-20%蔗糖梯度等滲溶液進行二次離心。

11. 細胞純度可在步驟 10 後使用瑞氏染色方法確定，細胞活性可用台盼藍處理後觀察。

12. 如所實驗後細胞得率或活性過低，請天津灝洋以尋求幫助，具體(ti)

詳見“【生產(chan) 企業(ye) 】”項目下內(nei) 容。

【檢驗方法】

情況 A: 血液樣本小於(yu) 3ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支 15ml 離心管，加入 3ml 分離液置於(yu) 18-22℃。

2. 將血液樣本小心加於(yu) 分離液之液麵上。18-22℃，400g 離心 20 分鍾。低溫（如 4 度）離

心會(hui) 降低細胞得率。

3. 離心後，用吸管小心吸出分離液上層（包含白細胞的細胞層）0.5cm 以上的上清液部分，

棄去。

4. 用吸管小心吸取分離液層、白細胞層及紅細胞層置於(yu) 另一新離心管內(nei) 。

5. 在步驟 4 中所得離心管中加入 10ml 細胞洗滌液（產(chan) 品編號：2010X1118）混勻。

6. 250g 離心 10 分鍾。

7. 棄上清，沉澱使用紅細胞裂解液（Cat#：NH4CL2009）裂解紅細胞（裂解過程參見下述【紅

細胞裂解液使用說明】）。

8. 裂解後再經三次洗滌去除紅細胞內(nei) 溶物和碎片後即為(wei) 所需白細胞。

9.後以 0.5ml 後續試驗所需相應液體(ti) 重懸細胞。

情況 B: 血液樣本大於(yu) 等於(yu) 3ml 時，實驗方法如下：

1. 首先按“【注意事項】第 4 條”所述方法稀釋血液樣本。

2. 取一支適當的離心管，加入分離液（加入量與(yu) 稀釋後的血液樣本體(ti) 積相等），置於(yu)

18-22℃。

3. 將經稀釋處理的血液樣本小心加於(yu) 分離液之液麵上。18-22℃，400g 離心 20 分鍾。低溫

（如 4 度）離心會(hui) 降低細胞得率。注：加入血液樣本後，樣本及分離液總體(ti) 積不得超過

離心管總體(ti) 積的三分之二。

4. 剩餘(yu) 步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟

【紅細胞裂解液使用說明】

本裂解液有別於(yu) 市場上銷售的其它紅細胞裂解液，其配方經過本公司優(you) 化在裂解紅細

胞的同時不損傷(shang) 並在一定程度上保護淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞，所獲

得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態。另外，本裂解液中無DNA及RNA酶，配

合細胞分離液使用所提細胞可廣泛用於(yu) 細胞培養(yang) 及分子生物學實驗，請廣大用戶從(cong) 優(you) 選擇。

紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱ACK Lysis Buffer，是一種用於(yu)

從(cong) 人或鼠等的血液或組織細胞樣品中裂解並去除無細胞核紅細胞的溶液。

本裂解液不適用於(yu) 有細胞核紅細胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細胞。本裂解液經過無菌

處理，處理過的血液或組織細胞樣品可以用於(yu) 後續的原代培養(yang) 、細胞融合以及核酸或蛋白的

提取及各種常規的分析和檢測。

使用說明：

A. 對於(yu) 組織細胞樣品：

a. 新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

b. 加入3-5倍細胞體(ti) 積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鍾。例如細胞沉澱的體(ti)

積為(wei) 1ml，則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

c. 400-500g離心5分鍾，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

d. 如果發現紅細胞裂解不*，可以重複上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(hui) 影響後續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，重懸沉澱，400-500g離心

2-3分鍾，棄上清。可再重複1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為(wei) 細胞沉澱

體(ti) 積的5倍。4℃離心效果更佳。

White Blood

Cell

f. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱後即可進行計數等後續實驗。

B. 對於(yu) 組織細胞樣品無需洗滌的快速操作步驟：

a. 新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

b. 對於(yu) 0.2ml細胞沉澱加入1ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鍾。本步驟在室溫

或4度操作均可。

c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，混勻。

d. 400-500g離心5分鍾，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

e. 如果發現紅細胞裂解不*，可以重複上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(hui) 影響後續的一些檢測。

f. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱後即可進行計數等後續實驗。

注：對於(yu) 常規步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節省洗滌液的用量，並且洗滌效果也更好一些，同

時不需要大體(ti) 積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體(ti) 積的離心管。

C. 對於(yu) 血液樣品：

a. 取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鍾，離心棄上清。

b. 加入6-10倍細胞體(ti) 積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鍾。例如細胞沉澱的體(ti)

積為(wei) 1ml，則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對於(yu) 鼠

的血液，裂解1-2分鍾已經足夠，對於(yu) 人的外周血，宜延長裂解時間至4-5分鍾，並且裂

解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

c. 400-500g離心5分鍾，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

d. 如果發現紅細胞裂解不*，可以重複上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(hui) 影響後續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，重懸沉澱，400-500g離心

2-3分鍾，棄上清。可再重複1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為(wei) 細胞沉澱

體(ti) 積的5倍。4℃離心效果更佳。

f. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱後即可進行計數等後續實驗。

注：對於(yu) 微量或少量的血液樣品，可以在*步中不進行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血

液體(ti) 積的紅細胞裂解液，並在室溫或4℃裂解4-5分鍾。對於(yu) 鼠的血液，裂解4-5分鍾已經足夠，對於(yu) 人的外

周血，宜延長裂解時間至10分鍾，但通常不宜超過15分鍾，並且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。後續步驟相同。

D. 對於(yu) 血液樣品無需洗滌的快速操作步驟：

a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鍾。

溫或4度操作均可。注意：對於(yu) 鼠的血液，裂解4-5分鍾已經足夠，對於(yu) 人的外周血，宜

延長裂解時間至10分鍾，但通常不宜超過15分鍾，並且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促

進紅細胞裂解。

b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，混勻。

c. 400-500g離心5分鍾，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

d. 如果發現紅細胞裂解不*，可以重複上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(hui) 影響後續的一些檢測。

e. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱後即可進行計數等後續實驗。

注：對於(yu) 常規步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節省洗滌液的用量，並且洗滌效果也更好一些，同時

不需要大體(ti) 積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體(ti) 積的離心管。

【儲(chu) 存條件及有效期】

18-25℃避光保存，有效期 2 年。啟封後置 4℃保存，溶液變渾濁或感染細菌時，產(chan) 品

失效。本品為(wei) 真空包裝，未啟封前置於(yu) 10℃ 以下易出現白色結晶，影響分離效果。

【適用儀(yi) 器】

半徑 15cm 水平轉子離心機。

【樣本要求】

本分離液要求血液為(wei) 新鮮的抗凝血，血液收集時應無菌操作且在儲(chu) 存、處理和運輸過

程中避免冷凍和冷藏。

【參考值（參考範圍）】

本實驗白細胞的提取率及純度均大於(yu) 80%。

【檢驗結果的解釋】

由於(yu) 各品牌離心機的性能不同，國內(nei) 南北地區溫度環境和四季的差異，可能影響分離效

果，用戶可以調節離心轉數和離心的時間，摸索*的分離條件（具體(ti) 分離條件各實驗室自

定）。

【檢驗方法的局限性】

本試驗要求，在正常大氣壓下，樣本、分離液及分離環境溫度為(wei) 18-22℃。本分離液在

低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。

【產(chan) 品性能指標】

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

無菌 直接接種培養(yang) 14 天後培養(yang) 基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μ m 以上的不溶性微粒 20 粒以下，含

μ m 以上的不溶性微粒 5 粒以下

【參考文獻】

1 鄭德先，吳克複，褚建新.現代實驗血液學研究方法與(yu) 技術.北京醫科大學中國協和醫科大

學聯合出版社，1999

2 鄂征.組織培養(yang) .北京出版社，1995

3 朱立平，陳學清.免疫學常用實驗方法.人民軍(jun) 醫出版社，2000

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